含临床病毒株聚合酶逆转录酶区的乙肝病毒DNA稳定复制细胞系的构建

• 作者: 向明确 张文露 胡接力 蔡雪飞 黄爱龙
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 乙型肝炎病毒 逆转录聚合酶 复制 稳定细胞系
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 13-18
• 页数: 6页
• 分类号: R512.6+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2013.01.003

摘要

目的 构建含有临床病毒株聚合酶逆转录酶(RT)区的乙肝病毒(HBV) DNA稳定复制细胞系.方法 采用巢式PCR从患者血清扩增HBV DNA片段,利用片段置换反应将该片段克隆到HBV DNA复制载体,并在该载体上引入新霉素抗性基因,在确认该重组DNA体外可复制后,将其转染HepG2细胞,G418筛选,采用real-time PCR结合ELISA及Southern blot检测初筛和鉴定HBV DNA稳定复制细胞系.结果 从患者血清扩增出的HBV DNA片段nt55～1654被成功置换到HBV复制质粒pLL相应区域,得到质粒p11;新霉素抗性基因表达片段被克隆到p11中HBV DNA下游,获得质粒p11-neo,Southern blot检测证实p11-neo可支持体外复制；p11-neo转染HepG2后,经筛选鉴定,获得了可支持HBV DNA稳定复制的细胞系3-10.结论 建立了含有临床病毒株聚合酶RT区的HBV DNA稳定复制细胞系,real-time PCR结合ELISA有助于HBV DNA稳定复制细胞系的快速初筛鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄爱龙	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	236	1190	16.0	23.0
2	胡接力	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	18	12	2.0	2.0
3	张文露	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	14	34	3.0	5.0
4	蔡雪飞	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	11	26	3.0	5.0
5	向明确	重庆医科大学重庆市第九人民医院感染科	7	87	5.0	7.0