人端粒酶逆转录酶慢病毒载体的构建及人肝细胞的初步筛选

• 作者: 李丽玲 杨冬华 梁旭竞 汤绍辉 金玲 陈友鹏 陈小佳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 端粒酶逆转录酶 慢病毒载体 肝细胞
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 826-829
• 页数: 4页
• 分类号: R318.14
• 字数: 4070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2009.04.042

摘要

目的: 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)慢病毒表达载体,将其转染人肝细胞L02并且通过杀稻瘟筛选出阳性克隆细胞.方法: 以PBABE-puro-hTERT质粒为模板PCR法获取目的基因attB1- hTERT-attB2,通过BP反应克隆至pDONR221;采用LR重组酶将pDONR221-hTERT和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成pLenti6/V5-DEST- hTERT.将重组载体pLenti6/V5-DEST- hTERT与包装质粒充分混合,利用脂质体共转染293FT细胞,获得重组慢病毒颗粒.将其感染人肝细胞L02,通过杀稻瘟筛选获得阳性克隆.结果: 测序发现入门载体pDONR221包含的目的基因hTERT 1547位点存在点突变(原碱基A变成G),通过定点突变技术成功诱变并鉴定慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST- hTERT成功构建.重组慢病毒滴度为1×108 TU/L,获得20株稳定抗性的单克隆细胞.结论: 成功构建人端粒酶逆转录酶的慢病毒表达载体,获得稳定抗性的单克隆肝细胞,为进一步建立永生化肝细胞系奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨冬华	暨南大学附属第一医院消化科	108	432	10.0	15.0
2	汤绍辉	暨南大学附属第一医院消化科	164	444	9.0	14.0
3	陈小佳	暨南大学生物工程研究所	31	287	9.0	16.0
4	梁旭竞	暨南大学附属第一医院消化科	30	159	7.0	10.0
5	金玲	暨南大学附属第一医院眼科	30	315	11.0	16.0
6	李丽玲	暨南大学生物工程研究所	4	27	3.0	4.0
7	陈友鹏	暨南大学附属第一医院感染科	40	208	8.0	11.0