人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建

• 作者: 丁兰萍 刘红梅 宫亚欧 张巧 杨胜利 薛乐勋 赵国强
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人端粒酶逆转录酶 原核表达载体 重组质粒
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 411-413
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2672字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2005.03.014

摘要

目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达.方法:用RT-PCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoR I酶切位点的hTERT基因片段,与pGEM-T Easy连接,转化感受态大肠杆菌JMl09,经蓝-白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoR I酶切获取目的片段,并与EcoR I酶切过的pGEX-4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落.基因测序并用Omega 2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性.通过诱导pGEX-4T-1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Western blot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量.结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%.Western blot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%.结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张巧	郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室	45	147	7.0	9.0
2	赵国强	郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室	245	807	11.0	16.0
3	薛乐勋	郑州大学细胞生物学研究室	140	1187	18.0	26.0
4	杨胜利	郑州大学基础医学院食管癌研究室	33	134	7.0	10.0
5	刘红梅	郑州大学基础医学院食管癌研究室	11	17	3.0	3.0
6	宫亚欧	郑州大学基础医学院食管癌研究室	9	73	5.0	8.0
7	丁兰萍	郑州大学基础医学院食管癌研究室	3	25	2.0	3.0