慢病毒介导过表达端粒酶逆转录酶的人口腔黏膜上皮稳定细胞系的构建

• 作者: 何祥一 孙贵军 张潇 曾飒 王立鹤 秦晓东 解斯羽 车春晓
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 口腔黏膜上皮细胞 人端粒酶逆转录酶 慢病毒载体 稳定表达 永生化
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 443-447
• 页数: 5页
• 分类号: Q813
• 字数: 4312字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7518/hxkq.2016.05.002

摘要

目的 通过慢病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的口腔黏膜上皮细胞(OMECs),探索构建高效、稳定的永生化OMECs细胞系的方法.方法 提取293T细胞总RNA,应用聚合酶链反应(PCR)法扩增hTERT基因全长,构建重组慢病毒载体pLVX-puro-hTERT.包装慢病毒颗粒后感染人正常OMECs,经嘌呤霉素抗性筛选获得阳性克隆,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测hTERT基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 成功构建了pLVX-puro-hTERT过表达慢病毒载体并感染到OMECs中;感染细胞与正常OMECs形态相似,呈铺路石样生长;实时荧光定量PCR和Western blot结果均显示,hTERT在感染细胞中高表达,与正常细胞相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过慢病毒法成功建立了过表达hTERT的OMECs稳定细胞系,为构建高效、稳定增殖的人永生化OMECs细胞系奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何祥一	兰州大学口腔医学院	43	118	7.0	7.0
2	张潇	兰州大学口腔医学院	9	41	3.0	6.0
3	秦晓东	中国农业科学院兰州兽医研究所	7	5	2.0	2.0
4	解斯羽	兰州大学口腔医学院	2	3	1.0	1.0
5	车春晓	兰州大学口腔医学院	3	8	2.0	2.0
6	孙贵军	兰州大学口腔医学院	4	7	2.0	2.0
7	曾飒	兰州大学口腔医学院	2	5	2.0	2.0
8	王立鹤	兰州大学口腔医学院	1	3	1.0	1.0