稳定表达GHR基因和突变体的CHO细胞株的构建及其功能分析

• 作者: 吴丽华 唐文琴 廖志勇 张霆 陈晓丽
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 人生长激素受体基因 突变体 CHO细胞 STAT5
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 13-18
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3282字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建稳定表达先天性生长激素不敏感综合征相关基因-hGHR及突变体(hGHR-E42K、hGHR-H56R)的CHO细胞株,测定野生株和突变株的STAT5-磷酸化水平.方法 利用已有的PUC-hGHR质粒,定点突变获得2个hGHR突变体(hGHR-E42K、hGHR-H56R),限制性酶切法将目的 基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1/(zeo+);然后用Lipofectamine2000将重组子转染至CHO细胞,通过Zeocin抗性筛选稳定表达hGHR及突变体的细胞群;并用RT-PCR和Westem blot证实hGHR、STAT5-P表达水平.结果 测序验证hGHR的E42K和H56R错义突变成功引入,并克隆到真核表达载体;转染后在CHO细胞株中成功检测到hGHR和突变体的mRNA和蛋白;突变细胞株(E42K、H56R)的磷酸化STAT5蛋白表达量低于野生株.结论 成功构建携带稳定表达hGHR及突变体的CHO细胞株,E42K、H56R突变部分阻碍STAT5蛋白进行磷酸化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张霆	首都儿科研究所分子免疫实验室	79	456	12.0	17.0
2	陈晓丽	首都儿科研究所分子免疫实验室	15	69	5.0	7.0
3	廖志勇	江西师范大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0
4	吴丽华	首都儿科研究所分子免疫实验室	5	19	2.0	4.0