增强型绿色荧光蛋白标记的Hela细胞株的建立

• 作者: 司履生 杨军 王一理 苏宝山 陈晓黎
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 增强型绿色荧光蛋白 宫颈癌 Hela细胞
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 717-719,封4
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 语种: 中文

摘要

目的 构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系.方法 PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagen tip 500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞,G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行荧光检测EGFP的表达,采用激光共聚焦显微镜观测器检测荧光特性.结果 PCR和DNA测序证实pEGFP质粒结构正确;在倒置荧光显微镜下,转染24h后,部分Hela细胞可见绿色荧光,转染72h时,大约80% Hela细胞内均可见绿色荧光.加入含G418的选择性培养基进行选择性培养,选择荧光较强的Hela细胞经有限稀释,持续筛选及克隆化培养,获得稳定表达绿色荧光的Hela细胞克隆,扩大培养并传至10代以上,将此细胞株命名为Hela-EGFP.激光共聚焦显微镜观察发现:在蓝光 (-395nm)激发时,Hela-EGFP细胞绿色荧光激发波长为395nm,最大发射峰为509nm.结论 Hela-EGFP细胞株具备稳定表达EGFP的能力,为实时可视化进行宫颈癌侵袭转移机制的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏宝山	西安交通大学医学院第二附属医院病理科	68	461	12.0	17.0
2	杨军	西安交通大学医学院第二附属医院病理科	107	709	15.0	20.0
3	王一理	西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所生物医学信息工程教育部重点实验室	112	527	9.0	17.0
4	司履生	西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所生物医学信息工程教育部重点实验室	63	275	8.0	12.0
5	陈晓黎	西安交通大学医学院第二附属医院病理科	26	76	5.0	7.0