多发性骨髓瘤细胞株ARH-77恶性相关基因hMMTAG<em>2</em>的克隆和序列分析

• 作者: 江元山 汤立军 田尔明 田菁燕 申群喜 石奕武 胡维新
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 医学
• 关键词: 多发性骨髓瘤 ARH-77细胞株 基因克隆 多发性骨髓瘤转化基因2(hMMTAG2)
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 143-148
• 页数: 6页
• 分类号: R73,Q78
• 语种: 英文

摘要

为从人类多发性骨髓瘤细胞株中克隆新的恶性相关基因, 构建人类多发性骨髓瘤细胞株ARH-77 cDNA文库. 从ARH-77细胞中提取mRNA并逆转录合成双链cDNA, 经PCR扩增后, 插入表达载体, 得到ARH-77细胞cDNA表达文库. 将文库菌落印迹至尼龙膜, 分区培养提取质粒DNA, 建立基因池, 并分别转染NIH/3T3细胞. 经G418筛选并计集落数, 选择克隆数最多的基因池进入第二轮. 如此反复进行. 通过测序, 排除所有已知的癌基因、抑瘤基因、细胞因子及其受体, 获得了有转化活性的cDNA克隆A62-17. 进一步使用RACE技术对5′端进行快速扩增, 获得全长为1300 bp的cDNA序列, 该基因由8个外显子组成, 编码产物为263个氨基酸组成的多肽链. 将该基因暂时命名为多发性骨髓瘤转化基因2 (tumor-associated gene 2 from human multiple myeloma, hMMTAG2). 该基因定位于人类染色体1q42.13. 生物信息学分析发现, hMMTAG2编码有多个蛋白激酶的磷酸化位点、N-肉豆蔻酸化位点及核定位信号, 提示该基因的表达产物可能是细胞核内的一种信号分子.