Chitosan-DNA基因免疫诱导粘膜特异性免疫应答及其抗CVB3感染作用

• 作者: 储以微 徐薇 沈燕 熊思东 王立新 许从峰
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CVB3 VP1 Chitosan-DNA疫苗 滴鼻 免疫保护
• 年，卷（期）: 2003,（12）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 813-817
• 页数: 5页
• 分类号: R392.12
• 字数: 4147字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建新型粘膜基因疫苗,诱生CVB3 VP1特异性粘膜免疫应答,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础.方法:抽提CVB3 RNA,以RT-PCR扩增得VP1基因,插入真核表达载体pcDNA3中,构建质粒pcDNA3-VP1,以Chitosan多糖包裹形成Chitosan-DNA基因疫苗.将该质粒转染Hela细胞,观察其体外表达情况.以50 μg DNA剂量的Chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB/C小鼠3次,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答;隔4周以5LD50活CVB3致死攻击小鼠,观察攻击后存活情况.结果:制备了直径为80～100 nm的Chitosan-DNA复合物颗粒,体外转染证实Chitosan-DNA复合物中VP1的表达高于pcDNA3-VP1质粒-Lipofectamine的表达水平.该疫苗滴鼻3次免疫后,不仅诱生了高水平的IgG,而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体,第6周抗体P/N值分别达3.5和3.2.特异性细胞免疫应答研究发现,该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用,并显著高于pcDNA3-VP1和pcDNA3组.CVB3攻击后,可保护33.3%小鼠长期存活,而pcDNA3和pcDNA3-VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为8.5和10.8天.病理学研究显示:Chitosan-DNA免疫小鼠心肌组织基本正常,而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润.结论:Chitosan-DNA基因疫苗滴鼻免疫可诱生CVB3特异性粘膜IgA应答及CTL反应,具有一定的抗CVB感染的免疫保护力.