摘要:
水稻是世界上最重要的粮食作物之一,为世界近一半人口提供食物来源.水稻微卫星图谱的构建有利于遗传基础的研究及分子育种.本研究通过发展位置特异性微卫星标记,对微卫星标记进行了图谱的整合,并利用微卫星等标记对水稻抗稻瘿蚊基因Gm6和抗褐飞虱基因Bph3进行了分子定位.主要研究结果如下:1、利用网上公布的序列信息进行位置特异性微卫星引物的设计和微卫星图谱的整合.共发展了198个PSM标记,有105个标记的基序为GA/CT重复,占53.3%,绝大多数标记(98.0%)的重复序列长度在20bp以上.将原有微卫星标记和本实验发展的PSM标记整合到RGP遗传图谱上,整合后总的SSR标记数为718个,新图谱的遗传距离总长度为1527.2cM,平均标记密度为每2.13cM有一个SSR标记,其中第1染色体的标记最密(1.73cM/个),而第11染色体的标记密度最低(3.32cM/个).将本研究发展的微卫星图谱与IRMI发表的高密度微卫星进行了比较,结果显示本研究发展的微卫星图谱标记分布比较均匀,只有3个区域标记间遗传间距在10cM以上,5个区域在8-10cM,而IRMI微卫星图谱分别有17和12个.2、采用G2417-2-1×抗蚊青占(239株)和G3004-4×抗蚊青占(243株)两个F2作图群体对水稻抗稻瘿蚊进行了分子定位,并对该基因区域进行物理作图.利用两个SSR标记(RM348和RM255)和一个STS标记(RG476/ ScaⅠ)将Gm6基因初定位在第4染色体的长臂上,然后利用网上公布的序列信息在附近设计高密度的位置特异微卫星标记,对Gm6基因作精细定位,将其定位在PSM112和PSM114两标记之间,遗传距离为0.4 cM的区域内,另有PSM101、PSM106和PSM115三个标记与Gm6基因完全连锁.筛选出两个BAC重叠克隆AL606645和AL606660用于Gm6基因的物理作图,利用这两个克隆上有多态的位置特异微卫星标记将该基因限定在大约158kb的物理区域内.3、利用RH ×七丝软占F2作图群体对水稻抗褐飞虱基因Bph3进行分子定位.根据F3株系表型鉴定结果,从F2作图群体的237株中选出27株抗感极端株用于Bph3基因的分子定位.选择第4染色体上具有多态性的微卫星标记对该基因进行连锁分析,发现两个标记RM261和RM119与Bph3的遗传距离均为8.0cM.在这两标记之间的区域内发展位置特异微卫星标记,两个新发展的微卫星标记PSM323和PSM194与Bph3基因的遗传距离分别为8.0cM和3.8cM.因而Bph3基因被定位在第4染色体长臂上PSM323和PSM194两标记之间.