构建特发性脊柱侧弯椎间盘终板抑制消减cDNA文库的方法和意义

• 作者: 何海龙 刘勇 吴志宏 杨新宇 杨瑜 王以朋 翁习生 邱贵兴 郭树彬
• 来源期刊: 中华医学全科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 特发性脊柱侧弯 抑制消减杂交 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 分类号: R682.3
• 语种: 中文

摘要

目的:构建青少年特发性脊柱侧弯椎间盘终板抑制消减cDNA文库,以研究特发性脊柱侧弯的基因表达变化间的内在联系及规律.方法:从来源于一位特发性脊柱侧弯患者顶椎椎间盘终板凸凹侧软骨组织分离poly(A)+RNA,经反转录后,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过两轮杂交和两次抑制PCR构建了两种组织间差异表达基因的cDNA消减文库.结果:挑取300个克隆进行PCR扩增检测是否有插入片段,结果显示其中248个克隆有插入片段,片段大小范围为250～750pb.结论:应用消减杂交的方法,再经适当的改进,在去除相同遗传背景的条件下,可以建立较特异性脊柱侧弯椎间盘终板cDNA消减文库,该文库为进一步批量筛选特发性脊柱侧弯发生的相关基因群并克隆特发性脊柱侧弯相关表达基因,研究其特发性脊柱侧弯发生的分子机理与生物学特性间的关系奠定了基础.