乙型肝炎病毒全长PreS蛋白基因在酵母中的表达

• 作者: 叶林伯 吴正辉 孙明颢 贺石汉 郜金荣
• 来源期刊: 中国病毒学
• 学科: 医学
• 关键词: HBV preS基因 毕赤酵母表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 99-103
• 页数: 5页
• 分类号: R512.8
• 字数: 3484字
• 语种: 英文

摘要

应用直接提取法从武汉地区乙型肝炎病人患者阳性血清中提取HBV基因组,以此作为模板,用引物PCR方法获得全长preS基因,该片段的DNA大小1 203bp.克隆到pUCm-T载体中,应用M13通用引物进行序列测定,与中国HBV标准株序列比较,证实基因型为Adr亚型.有24个核苷酸不同,preS基因包含3个起始密码ATG分别为preS1,preS2,和S的翻译起点.然后将preS基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,将Sal I线性化的pPIC9K-preS质粒用电击法导入巴斯德-毕赤酵母GS115His-中.通过MD-G418平板筛选和5'AOX1和3'AOX1引物PCR鉴定获得稳定重组HBV全长preS基因的His+Mut+酵母工程菌株.此酵母菌株在合适的培养条件和甲醇诱导下高效表达产生全长PreS蛋白并可分泌到培养液中,SDS-PAGE显示培养液中含有分子量约为48kDa的带;微孔ELISIA法证实表达并分泌到培养液中的PreS蛋白能够与HBV抗体阳性血清发生特异性反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴正辉	武汉大学生命科学院病毒研究所	16	41	4.0	5.0
2	郜金荣	武汉大学生命科学院病毒研究所	16	56	4.0	6.0
3	孙明颢	武汉大学生命科学院病毒研究所	1	8	1.0	1.0
4	叶林伯	武汉大学生命科学院病毒研究所	1	8	1.0	1.0
5	贺石汉	武汉大学生命科学院病毒研究所	3	19	3.0	3.0