用DDRT-PCR方法克隆小鼠精子发生早期相关基因的EST

• 作者: 俞作仁 关纪奎 葛晔华 薛社普 郭睿 韩代书 马静
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 荧光mRNA差异显示技术 精子发生 基因克隆 斑点杂交
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 92-96
• 页数: 5页
• 分类号: Q7
• 语种: 英文

摘要

为了避免差异显示技术中的放射性污染, 并用之于筛选、克隆精子发生早期的相关基因, 分离纯化了小鼠的原始精原细胞及B型精原细胞, 提取其总RNA, 逆转录获得cDNA, 以荧光差异显示方法筛选差异表达基因. 利用斑点杂交技术对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性. 选取16条差异显著的片段做克隆测序, 通过GenBank/ Blast比较, 有7个片段属于新的EST, 且均表现为在B型精原细胞中表达强度高于原始精原细胞. 提交GenBank获得注册号. 从中选取较有意义的3条基因片段通过半定量RT-PCR方法进一步验证其表达特征. 和传统的差异显示方法比较, 文中所采用的mRNA差异显示技术可快速排除假阳性结果, 避免同位素标记带来的放射性污染. 结果表明所获得的7个新EST均表现为B型精原细胞中高表达, 这些表达升高的基因可能与其后精子发生过程中的一系列特殊现象(如减数分裂、变态成形)有关, 为生精细胞的分化做物质上的准备.