PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究

• 作者: 吴限 宋福平 张杰 管宇 陈中义 黄大昉
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 DNA文库 PCR-RFLP 杀虫蛋白基因 基因克隆
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 398-402
• 页数: 5页
• 分类号: Q94
• 字数: 3415字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2003.04.008

摘要

Bt菌株C002对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力,PCR-RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～9kb的EcoR Ⅰ片段.染色体和质粒DNA分别经EcoRⅠ完全酶切和Sau3AⅠ部分酶切、电泳回收6～9kb片段.E.coli-Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库.约50个转化子合为一个转化子池,采用PCR-RFLP方法快速检测,分别从约2 000质粒DNA文库转化子和400个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆,相应命名为pHT-1Aa、pHT-1Ca、pHT-2Ab和pHT-X.限制酶切分析表明,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱.进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS-PAGE分析表明,只有cry1Ca表达了约130 ku杀虫晶体蛋白.初步杀虫生测结果显示,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力,7 d校正死亡率为100%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张杰	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	165	1879	22.0	38.0
2	陈中义	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	13	527	8.0	13.0
3	宋福平	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	51	535	14.0	20.0
4	吴限	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	2	40	2.0	2.0
5	管宇	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	2	40	2.0	2.0