卒中大鼠脑组织抑制性差减文库的构建

• 作者: 严睿 惠汝太 杨丽霞 王先梅 王燕 石燕昆 赵斌 赵颖 郭传明 魏玲 齐峰
• 来源期刊: 西南国防医药
• 学科: 医学
• 关键词: 抑制性差减 聚合酶链式反应 差异基因
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 123-126
• 页数: 4页
• 分类号: R643/Q291
• 字数: 2975字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-0188.2003.02.003

摘要

目的:建立抑制性差减文库为获得差异表达基因提供方法.方法:提取正常组及卒中发作组大鼠全脑组织总RNA,分离出mRNA.两组mRNA反转录合成cDMA.实验组称为tester,对照组称为driver.限制性内切酶RsaI消化产生平端.将tester cDNA分成两份,分别连接不同的接头(Adaptor),driver cDNA不连接接头.tester cDNA连接好接头以后,再和driver进行两轮杂交.第一次PCR时仅有连接不同接头的双链cDNA分子可以呈指数扩增.然后采用巢式引物进行第二次PCR,进一步减少PCR产物的背景,强化差异表达序列.结果:总RMA经甲醛变性凝胶电泳紫外光下可见28S、18S条带清晰,28S:18S比值约为1.5:1,未见降解.双链cDMA经RsaI消化,cDNA片段变小.已经扣除的cDMA,GAPDH晚5个～15个循环出现条带,说明差减文库得到了有效扣除.结论:建立大鼠卒中发作及正常大鼠脑组织两个抑制性差减文库,为我们下一步研究卒中相关基因提供了方便.