马铃薯块茎低温反应抑制差减文库的构建及鉴定

• 作者: 宋波涛 杨建文 柳俊 谢从华 陈霞
• 来源期刊: 中国农业科技导报
• 学科: 生物学
• 关键词: 马铃薯 差减杂交库 低温
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 68-74
• 分类号: Q786
• 字数: 5592字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0864.2010.06.12

摘要

以4℃(Tester)和20℃(Driver)处理的马铃薯野生种Solanum berthaultii的无性系CW2-1块茎为材料,构建马铃薯块茎低温反应抑制差减文库以进一步筛选差异表达基因.通过PCR签定后,获得了含有2 112个阳性克降的差减杂交文库.采用反向Northern方法对差减文库进行筛选鉴定,得到274个含有显著表达差异基因(P/N>3)的阳性克隆.从中挑选了53个克隆进行测序和同源比对分析,合并后获得29个代表不同基因的非重复序列片段,表明文席具有较高质量.随机选取其中4个EST进行基因表达分析,结果显示,在耐低温糖化的S.berthaultii块茎中,4℃下贮藏的块茎基因表达强度高于20℃贮藏的块茎;同在4℃贮藏条件下,S.berthaultii和易低温糖化栽培种E1的块茎中基因的表达量亦存在差异,让明所构建的差减文库富集了马铃薯块茎对低温响应的基因.