噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库构建及差减筛选融合蛋白

• 作者: 于凌娇 刘倩宏 刘麒 张履冰 王阔鹏
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 布鲁氏菌 噬菌体展示 融合蛋白 差减筛选
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 376-381
• 页数: 6页
• 分类号: R378.5
• 字数: 5639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.056

摘要

目的 建立噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库,差减筛选具有良好特异性、亲和力及反应原性的蛋白,为确定新型诊断用抗原奠定基础.方法 利用噬菌粒载体pYW01构建重组羊型布鲁氏菌16M株基因文库,辅助噬菌体VCSM13感染基因文库进而构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M蛋白文库.利用PEG纯化后,扩增蛋白文库.随机挑取单克隆,提取质粒,测序鉴定蛋白文库.通过差减筛选,选择具有良好特异性、亲和力及反应原性的表面蛋白,为确定诊断用抗原奠定基础.结果 通过DNA重组技术,构建羊型布鲁氏菌16M基因文库,库容量达到108 pfu/ mL,并且随机性良好.利用辅助噬菌体VCSM13包装基因文库,随机挑取蛋白文库中单克隆,提取质粒,经测序鉴定,成功构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库.利用免疫血清及感染血清对噬菌体展示蛋白文库进行差减淘选,筛选出6个噬菌体融合蛋白.经Western-blot分析6个噬菌体融合蛋白均具有较好的反应原性及特异性.结论 成功构建噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库,差减筛选出6个具有较好反应原性及特异性的融合蛋白,为后续新型血清学诊断制剂筛选奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘麒	吉林农业科技学院动物科技学院	7	31	4.0	5.0
2	王阔鹏	吉林农业科技学院动物科技学院	4	3	1.0	1.0
3	于凌娇	吉林农业科技学院动物科技学院	5	3	1.0	1.0
4	刘倩宏	吉林农业科技学院动物科技学院	12	22	3.0	4.0
5	张履冰	吉林农业科技学院动物科技学院	2	0	0.0	0.0