应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A结合蛋白

• 作者: 刘敏 张忠东 成军 李强 杨艳杰 王建军 董菁 钟彦伟 黄燕萍
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示技术 C型肝炎样病毒属 病毒非结构蛋白质类 基因文库
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 20-22
• 页数: 3页
• 分类号: R512.6+3
• 字数: 2244字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.01.008

摘要

目的筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白,为HCV致病机制的研究探索新的途径.方法应用噬菌体展示技术,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析.结果噬菌体经富集后,从随机挑选的12个克隆中得到2个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过序列同源性分析,确定了与HCV非结构蛋白NS4A结合的是肝细胞蛋白-丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活蛋白激酶5(MAPKAPK5).结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HCV非结构蛋白NS4A的结合蛋白,为进一步研究HCV的致病机制奠定了良好的基础.