PK15细胞cDNA T7噬菌体展示文库的构建及鉴定

• 作者: 刘书梅 王国栋 邓小芸
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: PK15细胞 cDNA T7噬菌体展示文库 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1372-1376
• 页数: 5页
• 分类号: S858.28
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2013.8.1372

摘要

[目的]构建PK15细胞cDNA T7噬菌体展示文库,为研究猪源病毒与宿主细胞的相互作用奠定基础.[方法]分离纯化PK15细胞mRNA,先后合成第一链和第二链cDNA,经平末端修饰后,定向导入EcoRⅠ和Hind Ⅲ接头,再由EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切消化,与噬菌体载体臂相连,然后用噬菌体包装抽提物进行体外包装,形成初级cDNA T7噬菌体展示文库,并通过滴度测定和PCR鉴定文库质量.[结果]经噬斑试验鉴定,初级文库滴度为2.0×105 PFU/mL,扩增后滴度达6.0× 1010 PFU/mL.PCR鉴定结果显示,文库的重组率为95.83％,且插入片段主要分布于500～2000 bp,其中500～750 bp的占21.73％,750～100 bp的占21.73％,1000～2000 bp的占39.13％.随机挑选20个克隆进行测序,发现均为猪源序列.[结论]构建的PK15细胞cDNA T7噬菌体展示文库具备较高库容量和重组率,质量良好,符合后续文库筛选的要求,可用于研究猪源病毒蛋白与PK15细胞的相互作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘书梅	安阳工学院生物与食品工程学院	22	117	7.0	10.0
2	王国栋	安阳工学院生物与食品工程学院	21	119	7.0	10.0
3	邓小芸	黑龙江职业学院动物医学学院	5	4	1.0	1.0