类风湿关节炎滑膜组织T7噬菌体展示cDNA文库的构建

• 作者: 李茹 栗占国 赖蓓 陈巧林
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示 cDNA 文库 类风湿关节炎 滑膜 自身抗原
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 临床免疫学
• 页码范围: 936-939
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3478字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建类风湿关节炎(RA)滑膜组织T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选和鉴定RA特异性基因的研究奠定基础.方法:取确诊RA患者的滑膜组织,用Trizol试剂提取总RNA,Oligotex离心柱分离mRNA,电泳检测其质量,逆转录合成双链cDNA,经末端修平、接头连接、酶切后去除过多接头,收集＞300 bp的cDNA片段,与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩增得到类风湿关节炎滑膜组织T7噬菌体展示cDNA文库.最后,通过铺平板滴度测定及PCR技术鉴定文库质量.结果:所构建原始文库重组克隆数为2×107 pfu,扩增滴度8.9×1010 pfu/ml.PCR法检测片段插入率为90%,插入片段在300～2 000 bp之间.文库噬菌体裂解液PCR扩增得到BiP基因片段.结论:成功构建了高质量的RA滑膜T7噬菌体展示cDNA文库,为下一步RA自身抗原的筛选奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	栗占国	北京大学人民医院风湿免疫科	286	2897	24.0	41.0
2	李茹	北京大学人民医院风湿免疫科	42	318	11.0	16.0
3	陈巧林	北京大学人民医院风湿免疫科	11	109	6.0	10.0
4	赖蓓	北京大学人民医院风湿免疫科	2	13	1.0	2.0