结核分枝杆菌T7噬菌体展示基因组DNA文库的构建与鉴定

• 作者: 万康林 刘海灿 曾焱华 游晓拢 王丽 邓湘赢
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 基因组DNA T7噬菌体展示文库
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1120-1123
• 页数: 4页
• 分类号: R378.91
• 字数: 2890字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2015.12.007

摘要

目的 利用T7噬菌体作为载体,构建结核分枝杆菌的基因组DNA文库.方法 提取MTB的基因组DNA,用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ进行双酶切,以对基因组DNA进行片段化,并在其末端加上定向的EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ黏性末端,用DNA片段纯化分离柱除去小于200 bp的片段和多余接头.将DNA片段与T7 10-3b噬菌体连接,经包装蛋白进行包装后转入BLT5403宿主菌以构建T7噬菌体展示基因组DNA文库,并检测文库的滴度和随机性.结果 成功提取到较高质量的MTB基因组DNA;构建的T7噬菌体展示基因组DNA文库的滴度约为6×106 pfu/cm3;用PCR检测结果表明,在随机挑取的16个噬菌斑中,其重组率为100％,且插入片段都介于250～2 000 bp左右.结论 成功构建了MTB T7噬菌体展示基因组DNA文库,为从基因组范围筛选MTB的优势抗原奠定了前期实验基础.