PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定

• 作者: 李珣 王晓晔 胡传活 陈思宇
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: PK-15细胞 酵母双杂交 三框cDNA文库 均一化 猪伪狂犬病病毒(PRV)
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 726-730
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.05.726

摘要

[目的]构建PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库,为深入研究猪伪狂犬病病毒(PRV)与宿主细胞间的相互作用机制打下基础.[方法]提取PK-15细胞总RNA,采用SMART和LD-PCR合成全长的双链cDNA(ds cDNA),并对其进行均一化和SfiI酶切处理.处理后的ds cDNA分别连接3种阅读框pGADT7-SfiI载体,将连接产物转化至大肠杆菌BH5α构建三框cDNA初级文库,取三框cDNA初级文库进行混合扩增,通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率,最后收集文库细菌提取文库质粒.[结果]3种读码框cDNA文库的库容量分别为3.0× 106、2.0× 106和2.0× 106 CFU,文库实际扩增基数＞150万CFU;一号和三号读码框的基因重组率均为100％,二号读码框的基因重组率大于93％.cDNA文库外源基因插入片段长度在500～3000 bp.cDNA文库质粒浓度约1.0 mg/mL,质粒收获量约3.0 mg.[结论]构建的PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库具有较高的重组率和库容量,符合酵母双杂交筛选要求,可用于研究PRV与PK-15细胞间的相互作用机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡传活	广西大学动物科学技术学院	37	338	10.0	17.0
2	王晓晔	广西大学动物科学技术学院	15	25	4.0	4.0
3	李珣	广西大学动物科学技术学院	15	34	4.0	5.0
4	陈思宇	广西大学动物科学技术学院	4	11	2.0	3.0