苏俄苹果酵母双杂交cDNA文库的构建与评价

• 作者: 张殉 张瑜 曹克强 段豪 王亚南 王树桐 胡同乐 赵绪生 钟敏
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 苏俄苹果 酵母双杂交cDNA文库 构建
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 页码范围: 69-73
• 页数: 5页
• 分类号: S432.4+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2014.0014

摘要

以苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)组培苗为试材,构建了以真核表达载体pGADT7为基础的苹果酵母双杂交cDNA文库.通过异硫氰酸胍法提取总RNA,Oligotex-dT30<Super>mRNA Purification Kit分离纯化mRNA,利用SMART法反转录合成双链cDNA(dscDNA),酶切纯化后的dscDNA与库载体pGADT7连接电转大肠杆菌,经涂板检测,初始文库滴度为2.67×105 cfu/mL,库容量为4.0×106 cfu,随后将文库进行了百万扩增,扩增文库滴度为1.0×108 cfu/mL,库容为1.5×1010 cfu,在文库中随机挑取46个克隆,利用PCR方法测得文库插入片段75％大于1 kb,重组率为100％,文库质量较高,符合文库构建的标准,为后续苹果分子生物学研究以及病毒与寄主互作研究奠定了基础.