鸡法氏囊B细胞酵母双杂交cDNA文库的构建

• 作者: 刘嘉 彭建平 谌南辉
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 酵母细胞 鸡法氏囊B细胞 cDNA文库 SMART技术
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 动物科学与动物医学
• 页码范围: 27-30
• 页数: 4页
• 分类号: S851.34+7.1
• 字数: 2329字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2286.2009.01.007

摘要

以酵母穿梭表达质粒pGADT72Ree为载体,采用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,在酵母细胞中构建鸡法氏囊B细胞的酵母双杂交cDNA文库.通过从分离的鸡法氏囊B细胞中提取总RNA,利用经修饰的CDS引物合成cDNA第一链,在链的末端可自动延伸CCC,在反应体系中加入SMART ⅢTM Oligo作为cDNA第二链合成的引物,进行长距离(LD)2PCR合成双链cDNA,后者经CLONTECH CHROMA SPIN+TE24000柱纯化后,与线性质粒pGADT72Rec共转化感受态酵母菌AH109,二者在酵母细胞中利用酵母细胞内具有较高的同源重组酶活性,进行同源重组成环行的有复制活性的文库质粒,在缺亮氨酸(LEU)培养板上筛选出所有克隆,即为鸡法氏囊B细胞的酵母双杂交cDNA文库.结果:共获得2.2×106转化子,文库扩增后,插入cDNA长度在0.5～3 kb.研究结论表明可在酵母细胞中利用CLONTECH SMART技术成功构建鸡法氏囊B细胞的酵母双杂交cDNA文库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谌南辉	江西农业大学动物科技学院	40	259	8.0	15.0
2	刘嘉	江西农业大学动物科技学院	13	34	3.0	5.0
3	彭建平	江西农业大学动物科技学院	2	5	2.0	2.0