利用膜蛋白酵母双杂交系统构建人尿道上皮细胞cDNA文库

• 作者: 余敏君 廖雅婷 戴佩 曾焱华 朱翠明 李玲玲 罗丹 邓湘赢
• 来源期刊: 中南医学科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 膜蛋白酵母双杂交 人尿道上皮细胞 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 478-481
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3043字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15972/j.cnki.43-1509/r.2018.05.008

摘要

利用基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交技术,构建人永生尿道上皮细胞(SV-HUC-1)cDNA文库.Trizol法提取人尿道上皮细胞总RNA,并分离纯化其mRNA;以mRNA为模板,合成cDNA第一链、第二链;通过T4 DNA聚合酶将DNA链两端加上5′接头;并将其大于1 kbp的片段与膜蛋白酵母双杂交载体pPR3-N连接,经电转化大肠杆菌感受态细胞,以构建基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,并检测文库的库容量和随机性.本研究成功构建了人尿道上皮细胞的基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,为进一步研究泌尿生殖道感染病原体与宿主尿道上皮细胞的相互作用奠定了实验基础.