猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建

• 作者: 丁思嘉 于海 周艳君 姜一峰 张文超 徐晶晶 李先斌 李慧春 李林 杨德强 王康 童光志 虞凌雪 陈鹏飞 高飞
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 猪小肠上皮细胞 酵母双杂交cDNA文库
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 19-24
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4319字
• 语种: 中文

摘要

猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,提取了IECs的总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs后,将其与pGADT7-Rec和carrier DNA共同转化至酵母Y187菌株,进行选择性培养基(SD/-Leu)筛选以及文库容量及质量的鉴定.结果显示,本研究构建的IECs-cDNA文库其库容量为1.3×108 pfu/mL,插入cDNA片段长度为250～2500 bp,文库阳性率达100％.本研究结果表明构建的IECs-cDNA文库具有较好的多态性,为后续研究PEDV与宿主细胞蛋白之间的互作关系提供了有力支持.