从T7噬菌体展示cDNA文库筛选生殖支原体黏附蛋白的互作蛋白

• 作者: 余敏君 戴佩 曾焱华 李玲玲 罗丹 邓湘赢 龙娴
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: T7噬菌体 生殖支原体 MgPa 互作蛋白
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 653-657
• 页数: 5页
• 分类号: R375+3
• 字数: 3721字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2018.05.003

摘要

目的:从人尿道上皮细胞(SV-HUC-1)T7噬菌体展示cDNA文库筛选生殖支原体黏附蛋白(MgPa)的互作蛋白.方法:以原核表达、纯化的重组生殖支原体黏附蛋白(rMgPa)为靶分子,对人尿道上皮细胞T7噬菌体展示cDNA文库进行4轮生物淘选,采用T7特异性引物扩增阳性克隆的插入片段,PCR产物测序后进行BLAST分析,间接ELISA、斑点免疫印迹和Far-western blot检测阳性噬菌体与rMgPa的特异结合.结果:经过4轮生物淘选,噬菌体克隆富集明显;DNA测序后经BLAST比对分析,结果表明随机挑取的32个阳性克隆包括7种不同序列,其中以RPL35重复次数最多;间接ELISA、斑点免疫印迹和Far-western blot结果表明7个代表性噬菌体均能与rMgPa特异结合.结论:60S核糖体蛋白L35(RPL35)可能是MgPa的互作蛋白,为深入了解MgPa的生物学功能以及生殖支原体的致病机制奠定了实验基础.