油菜cDNA表达文库构建及核盘菌致病因子互作蛋白的筛选和鉴定

• 作者: 张洁夫 戚存扣 杨恩东 杨清 王心宇 陈松
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 核盘菌 多聚半乳糖醛酸酶 C2结构域
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 192-197
• 页数: 6页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0496-3490.2008.02.003

摘要

核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]是引起油菜菌核病的病原真菌.核盘菌侵染植物细胞早期,可分泌一些细胞壁降解酶,如不同类型的多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PC).这些酶对病菌在植物组织上的定植起关键作用,同时酶活性的高低也决定病原菌的毒性或致病性.PG可以激活细胞的防卫反应而与其酶活性无关.为了解PG的信号转导途径,利用RT-PCR方法克隆了核盘菌的PG基因,将PG的编码区与酵母GAL4的DNA结合功能区融合,构建到酵母诱饵蛋白表达载体PGBKT7中;然后在酵母中构建了油菜cDNA表达文库.通过酵母双杂交方法在油菜cDNA表达文库中对与PG互作的蛋白进行了筛选,分离到一个与PG互作的蛋白,测序及BLAST分析表明该蛋白含有一个与钙离子结合的结构域,称为C2结构域(C2-domain),推测该蛋白是一种钙依赖的膜结合蛋白.该蛋白与拟南芥中一个含C2结构域功能未知蛋白的氨基酸同源性高达80.24%.利用半定量PCR分析了核盘菌诱导后该基因在油菜花、茎、叶中的表达,结果表明该基因在叶片中表达量最高.克隆到的C2蛋白与其他物种中的C2蛋白比较发现,与钙离子结合的天冬氨酸残基很保守.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨清	南京农业大学生命科学学院	63	803	15.0	25.0
2	戚存扣		97	1515	22.0	33.0
3	张洁夫		74	973	18.0	28.0
4	陈松		50	525	13.0	20.0
5	王心宇		1	13	1.0	1.0
9	杨恩东	南京农业大学生命科学学院	1	13	1.0	1.0