伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库的构建及筛选

• 作者: R. Blaga YU Shen-ye 于申业 付宝权 刘明远 吴秀萍 王学林 王峰 赫荣华 邓洪宽 高丽芳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 伪旋毛虫 肌幼虫 cDNA表达文库 构建 筛选
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 807-810
• 页数: 4页
• 分类号: R383.1
• 字数: 3841字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.09.004

摘要

目的 获取伪旋毛虫(Trichinella pseudospiralis)肌幼虫时期抗原性基因.方法 利用λZAP载体构建伪旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库;以感染伪旋毛虫60天后的猪血清为抗体探针,对伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行免疫学筛选,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析.结果 构建的伪旋毛虫cDNA表达文库的库容量为0.55×106pfu,重组率为95.6%,扩增后文库滴度为1.2×1010 pfu/mL.从2.0×105个重组噬菌体筛选获得阳性克隆27个.序列分析结果表明这27个阳性克隆共编码7种cDNA分子,其编码的类似蛋白分别为伪旋毛虫Tp21kDa蛋白、伪旋毛虫Tp28kDa蛋白、蛋白酶体激活因子亚单位(Proteasome activator subunit)类蛋白、Nudix水解酶(Nudix hydrolyase)类蛋白、凝集因子(Condensin)类蛋白、尿嘧啶糖基化酶(uracil glycosylase)类蛋白和一个未知蛋白.结论 获得两个反应原性较强且高拷贝的抗原基因,其分别编码Tp21kDa蛋白及蛋白酶体激活因子亚单位.