Cloning of Mouse Enamel Matrix Serine Proteinase Encoding Mature Protein

• 来源期刊: 吉林大学学报(医学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 牙胚 小鼠 丝氨酸内肽酰类 逆转录聚合酶链反应 聚合酶链反应 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 705-709
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆小鼠牙胚组织中釉基质丝氨酸蛋白酶(EMSP1)成熟肽编码区基因.方法:提取出生后7 d昆明种小白鼠切牙、磨牙牙胚总RNA,逆转录为cDNA,设计两对特异性引物,采用Touchdown PCR 和嵌套PCR方法,扩增出小鼠EMSP1起始密码子至终止密码子基因片段.将目的基因连入载体pMD-18T,转化入大肠杆菌JM109,通过蓝白筛选,挑选阳性克隆培养扩增,纯化重组质粒进行限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定.结果:限制性酶切图谱和核苷酸序列分析均表明所克隆cDNA为小鼠700 bp的EMSP1成熟肽基因编码.结论:成功地克隆了小鼠编码EMSP1成熟肽基因片段.