中国莱姆病螺旋体FP1外膜蛋白A的克隆表达及其抗原性的初步研究

• 作者: 万康林 郝琴
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 莱姆病螺旋体 外膜蛋白A 基因克隆表达
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 615-617
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2181字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.08.008

摘要

目的克隆并表达中国莱姆病螺旋体阿弗西尼疏螺旋体基因种参照菌株FP1的外膜蛋白A(OspA),并对其抗原性进行初步研究和基因序列分析,为研制中国莱姆病疫苗提供资料.方法设计引物,用聚合酶链反应(PCR)从莱姆病螺旋体FP1全基因组DNA中扩增出OspA编码基因,经酶切、连接,插入原核表达载体pET-11d,构成重组质粒pET-11d-ospA,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物用SDS-PAGE、Western blot分析,并进行基因序列测定.结果 rOspA在宿主菌内获得高效、稳定表达;相对分子质量(Mr)约为31×103,Western blot显示其与抗OspA的多抗有良好的免疫反应性;经测序显示该rOspA的基因片段长度为783bp,编码261个氨基酸,与欧洲标准菌株Pko和瑞士标准菌株VS461的OspA的DNA碱基序列比较,同源性均为94%.结论在国内首次成功地对中国莱姆病螺旋体阿弗西尼疏旋体基因种的代表菌株FP1的OspA基因进行了克隆和表达.并且证实rOspA有良好的抗原性,可进一步对其免疫保护性进行研究,以便为研制有效的莱姆病疫苗提供数据.