家兔角膜内皮细胞的快速培养

• 作者: 屈雷 杨学义 王馨 窦忠英
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 家兔 角膜内皮细胞 体外培养
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 243-246
• 页数: 4页
• 分类号: R77
• 字数: 4780字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5123.2004.02.011

摘要

目的:短期内体外扩增获得角膜内皮细胞.方法:采用揭膜法与消化法相结合获取原代角膜内皮细胞.并采用本实验室自行研制的角膜内皮细胞培养体系,在24孔培养板中分别以1×106,5×105,1×105,5×104,1×104,5×103细胞/孔浓度传代培养细胞,观察细胞的生长情况.结果:以1×105～5×105个细胞/孔浓度的细胞悬液并添加消化后的Descemet膜原代培养细胞,4d后细胞形成与在体细胞相似的密集单层,可以快速获取纯化的角膜内皮细胞.传代培养时,虽然不同接种浓度在4d的细胞增殖倍数差异不显著,但以1×10S～5×105个细胞/孔的浓度传代,3d就可生长成密集单层并可继续传代,现已传至第10代,但传至第4代,细胞形态开始发生改变;而以5×105个细胞/孔以上的浓度传代细胞时,1d的细胞贴壁率下降;以5×104个细胞/孔以下浓度传代,需7d方可长满皿底,并且细胞开始老化,体积变大,不能继续传代培养.或者细胞不能铺满皿底就衰老死亡.结论:本实验的培养体系可在短期内获得实验用角膜内皮细胞.角膜内皮细胞体外培养的增殖能力与其培养浓度和增殖的空间有关,1×105～5×105个细胞/孔的浓度是角膜内皮细胞快速增殖的适宜培养浓度.