2DE中IPG胶条转移到SDS-PAGE中的技术改进

• 作者: 张丽军 张健 梁宋平 谢锦云
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 2-维凝胶电泳(2DE) 蛋白质转移 改进 乳腺癌变组织
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 225-230
• 页数: 6页
• 分类号: Q51
• 字数: 3657字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7847.2004.03.005

摘要

2-维凝胶电泳(Two-dimensional gel electrophoresis,2DE)因其高通量、高分辨率等特点,被广泛用于蛋白质组的分离.然而,在蛋白质从第一向-固相(Immobilized pH gradients,IPG)胶条转移到第二向-十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶(Sodium dodecyl sulfate,SDS;Polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)时,常会引起蛋白质的损失.尤其是当将IPG胶条放入浓缩胶上时,在胶面不平、技术不熟练等情况下,常会在IPG胶条下引入气泡,导致蛋白质更多的损失.现将IPG胶条转移过程进行改进:先在第二向的十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶上加上薄薄的一层(约1～2 mm厚)琼脂糖溶液,然后将IPG胶条转移上去,最后再封住胶条的上面.这样的转移不会引起气泡,可以大大提高实验的成功率及重复性,有利于蛋白质的转移(尤其是相对分子质量大于40 kDa的蛋白质),提高质谱鉴定的准确性.此法操作简便,可以减少因操作不熟练而带来的麻烦.