一种新的GFP/DNA双标记流式细胞技术

• 作者: 从玉文 张军权 毛秉智 王治东 王澜 董波 陈肖华 饶亚岚 高荣莲 鲁茁壮
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞周期 流式细胞术 绿色荧光蛋白 基因表达 转染
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 565-568,597
• 页数: 5页
• 分类号: Q253
• 字数: 2603字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2004.06.020

摘要

目的:为了检测细胞转染了带绿色荧光蛋白(GFP)标记的融合基因后细胞周期的改变,以研究目的基因与细胞周期的关系,建立GFP/DNA双标记流式细胞技术.方法:①以小鼠脾细胞为模型,以不同浓度的多聚甲醛(PFA)预固定细胞不同时间,再换用70%乙醇固定细胞24 h以上,观察不同固定方法对细胞周期检测的影响;②以Ad-EGFP感染的Hep-2细胞为模型,观察不同固定方法对细胞周期、GFP阳性细胞检出率和GFP的荧光强度的影响;③用最佳固定方法观察转染p21/WAF1/CIP1-EGFP融合基因的293细胞的细胞周期,以验证方法的可靠性.结果:0.5%PFA预固定60 min,再换用70%乙醇固定细胞,不影响细胞周期检测,而且GFP荧光强度和转染效率的检测最佳.以此方法固定细胞,GFP/DNA双标记流式细胞技术检测了转染p21/WAF1/CIP1-EGFP融合基因的293细胞的细胞周期,可观察到p21表达阳性的细胞发生了G0/G1期阻滞.结论:优化的细胞固定方法可以有效地阻止GFP从细胞内流出,建立的GFP/NDA双标记流式细胞技术可以用于研究带GFP标签的基因表达蛋白与细胞周期的关系.