大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及GFP转染标记

• 作者: 席雨涛 徐正云 王亭忠 蒋文慧 马爱群
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 大鼠 骨髓间充质干细胞 培养 绿色荧光蛋白 转染
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 431-434
• 页数: 4页
• 分类号: R329.25
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2005.05.007

摘要

目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和培养方法,检测绿色荧光蛋白基因转染MSCs的瞬时表达及转染效率.方法应用Percoll密度梯度离心法分离大鼠MSCs,贴壁法不断纯化,流式细胞仪检测2代细胞表面CD34、CD71和CD90的表达,然后用pEGFP-N3与Lipofectamine 2000不同浓度比例转染MSCs,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率.结果①原代MSCs多呈纺锤形或梭形,有聚集生长的倾向,多3～5个细胞成为一个集落.传代后,细胞变为形态均一的排列有序的成纤维细胞样,长梭形,胞浆突起较少,胞体轮廓不甚清晰,胞体也相对较大;②GFP转染后24 h即可见绿色荧光蛋白表达,72 h表达最强,此后逐渐减弱,到4周时仍可见少量表达;③转染效率与质粒和脂质体的浓度比例有关,1:2到1:3最高.结论利用Percoll密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;GFP转染是一种较好的MSCs标记方法.