新生大鼠视网膜神经元及节细胞体外短期培养方法

• 作者: 李树宁 王大博 王竫华 白海青
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠 视网膜神经元 视网膜神经节细胞 存活力 轴突
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 107-110
• 页数: 4页
• 分类号: R771
• 字数: 5642字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2004.02.009

摘要

目的建立新生大鼠视网膜神经元原代培养体系,观察视网膜神经元和神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)在体外短期培养的生长特点.方法将新生大鼠视网膜细胞悬液接种于预先用鼠尾胶原包被的96孔细胞培养板中,按400×103·cm-2(高密度)及200×103·cm-2(低密度)2种密度接种,抑制非神经元生长,MTT比色法评价细胞活力;上述细胞悬液按高密度接种于24孔细胞培养板中,进行HE染色和Thy1单克隆抗体的免疫化学染色,测量视网膜神经元和RGC轴突的长度.结果视网膜神经细胞有聚集成簇生长的倾向,细胞活力在高密度培养时明显高于低密度培养;第3天细胞活力最高;视网膜神经元在体外形态多样,最初2d轴突生长速度最快,超过12.0μm·d-1;大多数RGC从第1天就再生出2个或2个以上的突起,第1天的平均轴突长度为12.5μm·d-1,从第2天起保持在8.0μm·d-1.第4天的平均轴突长度为29.45μm.结论以鼠尾胶原为支持物,经过酶消化法得到的新生大鼠视网膜神经元,包括RGC,能够在短期内表现出较高的细胞活力并再生出较长的轴突;高密度培养(400×103·cm-2)更有利于视网膜神经元在体外生长存活.