小麦6B染色体微切割及其不同片段的DNA文库构建

• 作者: 党本元 姜淑梅 尹维波 王槐 石锐 胡军 胡赞民 陈宇红 陈正华
• 来源期刊: 植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小麦 染色体徽切割 LA-PCR 染色体特定区域DNA文库
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 分子与发育生物学
• 页码范围: 1357-1365
• 页数: 9页
• 分类号: Q943
• 字数: 937字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-9072.2004.11.013

摘要

用Nd:YAG激光微束将处于丝分裂中期的小麦(Triticum aestivum L.)6B染色体微切割为四段,并用微细玻璃针将每个片段分别回收.将分离的染色体片段DNA用Sau3A接头介导的多聚酶链式反应(LA-PCR)分别扩增.Southem杂交证明4个特定区域的DNA确实来自于小麦基因组.用一系列(42对引物)位于6B染色体上的微卫星序列对微切割的染色体片段的PCR产物进行了验证.结果表明,获得的染色体片段的PCR产物来自于小麦6B染色体.将6B染色体4个片段的第二轮PCR产物克隆到pGET-vector中,建立了4个染色体特定区域的基因组文库,命名为R1、R2、R3和R4,分别包含2.1×105、2.74×105和2.93×105个重组子克隆.每个文库均随机挑选150个克隆进行质粒的小量制备和酶切验证.结果显示;插入片段大小在300～1800之间,平均大小为820～870bp,其中43%～48%的克隆为低/单拷贝序列,42%～47%为中/高拷贝序列.本研究为详细分析植物单染色体的不同片段的分子遗传学研究提供了基础.