普通小麦5DL染色体分选及染色体BIBAC文库构建技术体系优化

• 作者: 余茂云 徐兆师 曲延英 李连城 郭东伟 陈明 马有志
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 普通小麦 端体 细胞周期同步化 流式细胞术 染色体分选
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 354-361
• 页数: 8页
• 分类号: S5
• 字数: 7292字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.02.006

摘要

[目的] 优化小麦染色体流式分选及特定染色体BAC文库构建技术体系,为加速小麦基因组学研究提供技术支撑.[方法] 采用双阻断法对中国春 5DL 端体根尖分生组织进行细胞周期同步化处理,结合机械匀浆法制备染色体悬浮液进行流式核型分析,分选染色体5DL及PCR检测,对小麦染色体分选技术体系进行优化.对复合峰分选产物Bam HI酶切制备高分子量(high molecular weight,HMW)DNA,按10:1质量比与双元细菌人工染色体(binary-bacterial artificial chromosome,BIBAC)连接,电激转化感受态细胞DH10B,随机挑取100个重组子,经NotI完全酶切后脉冲电泳检测插入片段大小,优化小麦染色体BAC文库构建的技术体系.[结果] 经1.25 mmol-L-1羟基脲(hydroxyurea,HU)18 h,恢复6 h和1μ mol.L-1氟乐灵(trifluralin)2.5 h的顺序处理的小麦根尖分生组织,细胞有丝分裂指数可超过60%.流式核型分析表明,5DL 端体的流式核型图由清晰的三个复合峰和两个单峰组成.PCR鉴定表明,其中一单峰确由5DL染色体组成,部分酶切复合峰染色体3～10 min,可以获得50～300 kb的HMW DNA.连接产物检测显示平均插入片段可达100 kb左右,根据荧光通道值,估算5DL端体的大小约为482 Mb,构建库容为19 000个克隆的5DL端体特异文库即可达到约4倍的覆盖率.[结论] 上述两项优化技术适用于小麦染色体的分选及染色体特异文库的构建.