人可溶性白介素-4受体(sIL-4R)在甲醇酵母中的表达

• 作者: 张勇 李元 胡箭
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人可溶性白介素-4受体,Pichia pastoris
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 197-202
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4867字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.02.009

摘要

白细胞介素-4(IL-4)作为一种多功能的细胞因子在哮喘等变态性炎症反应中具有关键作用.IL-4通过结合细胞表面的白介素-4受体(IL-4R)发挥其生物学效应.sIL-4R缺少跨膜和胞内结构域,结合IL-4后不能产生信号传递来介导IL-4的生物学活性,但sIL-4R与IL-4结合的高度特异性和极高的亲和力使它非常适合作为理想的IL-4拮抗剂应用于哮喘等疾病的治疗.采用RT-PCR方法以人的单核细胞总RNA为模板扩增得到编码sIL-4R的基因片段,经测序证实后插入到甲醇酵母分泌表达质粒pPIC9K中,得到重组质粒pPIC9K/sIL-4R,利用限制性内切酶BglⅡ将其线性化后用电穿孔法导入Pichia pastoris GS115.分别用SDS-PAGE、Western blot 和Ligand binding blot对重组菌发酵上清中的sIL-4R进行鉴定.结果表明,在分子量约为30kD处有sIL-4R特异条带出现,并具有结合其配基IL-4的生物学活性.