表达的siRNA对人乳腺癌SKBr-3细胞中survivin基因的干涉作用

• 作者: 刘家云 李庆霞 杨安钢 王成济 许彦鸣 贾林涛 赵晶 黄红艳
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: survivin RNA干涉 真核表达载体 乳腺癌细胞
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 277-280
• 页数: 4页
• 分类号: R730.59|Q255
• 字数: 2844字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2004.04.010

摘要

目的:构建针对人survivin基因的siRNA真核表达载体,检测其对人乳腺癌SKBr-3细胞中survivin基因表达的干涉作用.方法:将合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入经HindⅢ和BglⅡ双酶切后的pSUPER真核表达载体.对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体介导,把重组质粒稳定转染入SKBr-3细胞,RT-PCR、Western blot印记杂交和细胞免疫化学法检测其对mRNA和蛋白表达的干涉效果.结果:经酶切鉴定及基因测序证实,重组质粒中已插入目的基因片段.RT-PCR显示两个干涉载体均抑制了目的基因的转录;Western blot印记杂交和细胞免疫化学检测结果显示pSUPER-S1对蛋白表达的抑制作用更强.结论:成功地构建了针对人survivin基因的RNA干涉真核表达载体pSUPER-S1和pSUPER-S2,并在人乳腺癌细胞株SKBR-3中有效发挥了对survivin基因的干涉作用.