补体3a受体第2胞外上174位硫化酪氨酸形成其配基结合位点

• 作者: 高金明
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 补体3a G蛋白耦联受体 酪氨酸 硫化
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 232-236
• 页数: 5页
• 分类号: R392.12
• 语种: 中文

摘要

目的探讨酪氨酸硫化对补体第3成分片断a受体(C3aR)配基结合的意义.方法体外构建全长人野生型C3aR及其突变型的表达质粒,并测定开放读框序列.证实序列正确后,转染人肾胚胎上皮细胞(HEK)293T 24 h后用35S-蛋氨酸/半胱氨酸或35S-硫标记转染的HEK 293T细胞,48 h后再进行免疫沉降实验.转染的HEK 293T细胞在24h后分成两部分,一部分细胞转染后48 h用流式细胞仪检测受体的表达水平,另一部分用于碘-125标记配基结合实验.测定转染了C3aR及其突变体的犬胸腺上皮细胞(Cf2Th)在48 h后钙离子细胞内流.结果突变型C3aR的表达较野生型降低;C3aR第2胞外环的5个酪氨酸翻译后被硫化修饰;将184、188、317和318位酪氨酸突变为苯丙氨酸即可阻断酪氨酸硫化,且不影响配基结合和钙离子细胞内流;但将174位酪氨酸突变为苯丙氨酸后,则配基和受体的结合完全被阻断,并可有效抑制钙离子内流.结论证实了C3aR与配基的双位点结合模型,174位硫化的酪氨酸是其配基重要的结合位点.七次跨膜片断(7TMS)的G蛋白耦联受体(GPCR)胞外环区域的硫化酪氨酸对配基结合功能可能具有决定意义.