改变天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶调控活性提高玉米中游离赖氨酸含量

• 作者: 于静娟 敖光明 朱登云 赵倩
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 天冬氨酸激酶(AK) 二氢吡啶二羧酸合成酶(DHDPS) 定点突变 玉米转化 游离赖氨酸 游离苏氨酸
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 247-252
• 页数: 6页
• 字数: 4623字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2004.03.002

摘要

以烟草(Nicotianatabacum var.samsum)叶片为材料,提取RNA,分离mRNA,进行RT-PCR扩增编码二氢吡啶二羧酸合成酶(DHDPS)的cDNA片段.序列分析表明,得到971个核苷酸的片段.与发表的序列相比,成熟蛋白N-端编码区缺失了21个核苷酸,且第627位核苷酸发生了C到T的改变,但没有引起氨基酸的变化.将dhdps cDNA编码区的第410和411位核苷酸由AC突变为TT,这一突变使DHDPS成熟蛋白的第104位氨基酸由天冬酰胺变为异亮氨酸.以玉米(Zea mays L.)总DNA为模板,PCR扩增DHDPS叶绿体转运肽的编码序列,序列分析结果显示,扩增片段中含有DHDPS转运肽完整编码区162个核苷酸及成熟蛋白N-端编码区21个核苷酸.将突变后的ak(天冬氨酸激酶)基因和dhdps cDNA与CaMV35S启动子、转运肽序列及潮霉素抗性基因连接,构建表达载体pRHAK和pRHDH,用基因枪轰击法将pRHAK和pRTDH转入玉米胚性愈伤组织,得到再生植株.经分子检测证明,目的片段已整合到玉米基因组中.T1代植株的游离氨基酸含量测定显示,部分转入ak基因的植株中,叶片和种子中游离苏氨酸的含量提高3～5倍.部分转入dhdps cDNA的植株中,叶片和种子中游离赖氨酸含量分别提高了4倍和1倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵倩	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	33	475	13.0	21.0
2	于静娟	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	33	517	14.0	22.0
3	敖光明	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	30	552	14.0	23.0
4	朱登云	中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室	19	321	12.0	17.0