LT-B转基因烟草植株的建立

• 作者: 刘红莉 司履生 孔令洪 张铮 来宝长 王一理 王喆之 郑瑾 雷霆
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 转基因烟草 植物疫苗 根瘤农杆菌
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 425-429
• 页数: 5页
• 分类号: R378.2|R394.33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2004.05.003

摘要

目的构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位(LT-B)基因的植物表达载体,并建立LT-B转基因烟草植株.方法用PCR从pMMB68扩增LT-B编码基因,将其克隆于pUCmT和pBI121载体,进而构建植物表达双元载体pBI-LTB,LT-B基因由CaMV 35S启动子控制表达;将pBI-LTB用电穿孔法导入根瘤农杆菌LBA4404;采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草,获得转基因烟草植株;用PCR、Southern、Western blot和ELISA检测转基因植株.结果经PCR及Southern杂交分析,共发现12株烟草的基因组中有LT-B基因整合;Western blot和ELISA分析表明有9株转基因烟草能有效表达LT-B蛋白,其表达量为烟草叶片总可溶蛋白的3.36～10.56μg·g-1TSP.结论建立的LT-B转基因烟草植株可成功表达LT-B,并具有五聚体结构,为进一步生产预防婴幼儿大肠杆菌腹泻可食用疫苗及黏膜免疫佐剂奠定了基础.