phCMV1和pcDNA3表达人绒毛膜促性腺激素β-C3d3融合蛋白的表达效率比较

• 作者: 朱影 李大金 王秀丽 袁敏敏
• 来源期刊: 生殖医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: phCMV1 pcDNA3 人绒毛膜促性腺激素β C3d3 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 205-212
• 页数: 8页
• 分类号: R392-33
• 字数: 4390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3845.2004.04.004

摘要

目的比较真核表达载体phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素β(hCGβ)-C3d3融合蛋白的表达效率,以获得hCGβ-C3d3融合蛋白的高效表达.方法利用高效真核表达载体phCMV1, 构建带有6个组氨酸纯化标签的融合蛋白表达质粒phCMV1-6His-hCGβ-C3d3;脂质体法介导phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和pcDNA3-hCGβ-C3d3转染CHO细胞,G418 (800 μg/ml)筛选抗性克隆,G418 (300 μg/ml)维持培养、扩增,待阳性克隆95%汇片时换用无血清培养基培养.放射免疫法检测hCGβ表达量,Western blot鉴定表达产物,Raji细胞免疫化学染色法鉴定hCGβ与C3d分子的成功融合.反复冻存和复苏高效表达hCGβ-C3d3融合蛋白的阳性克隆,比较表达效率的变化.用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物. 结果酶切鉴定及测序证实phCMV1-6His-hCGβ-C3d3构建正确,并成功地在CHO细胞中获得了6His-hCGβ-C3d3融合蛋白的表达.无血清培液中24、48、72 h融合蛋白的表达量分别为496、527、633 mIU/ml/1×106细胞(以hCGβ含量计算),phCMV1比pcDNA3载体的表达效率高1.4倍.3次冻存和复苏高效表达hCGβ-C3d3融合蛋白的阳性克隆,表达效率无明显变化.表达产物经纯化后获得了所需的hCGβ-C3d3融合蛋白. 结论 phCMV1表达hCGβ-C3d3融合蛋白的效率高于pcDNA3;用6His纯化标签可以成功纯化获得hCGβ-C3d3融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李大金	复旦大学附属妇产科研究所	200	1588	17.0	30.0
2	朱影	复旦大学附属妇产科研究所	39	360	13.0	17.0
3	王秀丽	复旦大学附属妇产科研究所	14	85	4.0	9.0
4	袁敏敏	复旦大学附属妇产科研究所	33	237	10.0	14.0