hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞中的分泌性表达、鉴定与纯化

• 作者: 孟毅 朱影 李大金 王明雁 王秀丽 袁敏敏
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: hCGβ hCGβ-C3d3 6His CHO phCMV1
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 743-747
• 页数: 5页
• 分类号: R392-33
• 字数: 4144字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建带有6个组氨酸纯化标签的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的分泌型真核表达质粒,在CHO细胞中获得具有生物学活性的重组蛋白的高效表达.方法:利用高效真核表达载体phCMV1, 构建phCMV1-6His-hCGβ和phCMV1-6His-hCGβ-C3d3,脂质体法转染CHO细胞,G418(800μg/ml)筛选抗性克隆.放射免疫法检测抗性克隆培液中hCGβ表达量,Western blotting和Raji细胞免疫化学法鉴定hCGβ-C3d3融合蛋白.用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物.结果:酶切及测序结果显示,phCMV1-6His-hCGβ及phCMV1-6His-hCGβ-C3d3构建正确.在CHO细胞中成功地获得了hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的高效表达,phCMV1载体的表达效率是pcDNA3的1.6倍.表达产物经纯化后得到了所需的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白.结论:hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞的高效表达为下一步比较hCGβ抗原及hCGβ-C3d3融合蛋白免疫动物的体液免疫效应和抗生育效果奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李大金	复旦大学附属妇产科研究所	200	1588	17.0	30.0
2	朱影	复旦大学附属妇产科研究所	39	360	13.0	17.0
3	王明雁	复旦大学附属妇产科研究所	32	360	13.0	18.0
4	孟毅	复旦大学附属妇产科研究所	22	208	9.0	14.0
5	王秀丽	复旦大学附属妇产科研究所	14	85	4.0	9.0
6	袁敏敏	复旦大学附属妇产科研究所	33	237	10.0	14.0