hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达

• 作者: 孟毅 朱影 李大金 李磊 王明雁
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: hCGβ C3d3 COS-7
• 年，卷（期）: 2002,（7）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 445-450
• 页数: 6页
• 分类号: R392.3
• 字数: 5327字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性.方法:用PCR方法在hCGβcDNA3'端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3.将此融合质粒转染瞬时表达系统COS-7细胞表达相应产物.其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白.Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性.结果:真核细胞瞬时表达系统COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白.1.0×105个COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72 h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高.在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基.同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性.结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pcDNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李大金	复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫研究室	200	1588	17.0	30.0
2	朱影	复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫研究室	39	360	13.0	17.0
3	李磊	复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫研究室	29	317	11.0	17.0
4	王明雁	复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫研究室	32	360	13.0	18.0
5	孟毅	复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫研究室	22	208	9.0	14.0