鸡补体C3d抗血清的制备与应用

• 作者: 任慧英 刘杉杉 姜良 李永清 闫敏鑫 黄秀芬
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡C3d 原核表达 蛋白纯化 抗血清 免疫学指标
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 47-51
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65|S858.31
• 字数: 4769字
• 语种: 中文

摘要

为探讨补体因子C3d在家禽健康诊断中的意义,将鸡补体因子C3d全长基因克隆到原核表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-C3d,然后将pET28a-C3d转化到大肠埃希菌BL21 (DE3)并以IPTG诱导表达.表达产物采用氯化钾染色切胶法进行纯化,获得分子质量约35 ku的C3d目的蛋白.将所得蛋白与弗氏佐剂制备疫苗免疫小鼠,制备抗鸡补体因子C3d血清.用制备的血清与重组杆状病毒表达的C3d蛋白进行Western blot和间接免疫荧光(IFA)鉴定血清的特异性.进一步应用该血清对不同健康状态的鸡血清进行C3d相关补体成份相对含量的检测.结果鸡补体因子C3d在大肠埃希菌中成功表达,纯化的C3d蛋白免疫小鼠后制备的抗血清经ELISA检测抗体效价达1∶256 000.Western blot和IFA结果显示,该血清能与重组杆状病毒表达的C3d蛋白发生特异性反应.临床应用试验表明,该血清不仅能用于检测不同健康状态鸡血浆中C3d的表达状况,还能用于ELISA检测不同鸡血清中C3d相关补体成分的相对含量差异.研究还证实鸡血浆中C3d相关补体成分的表达因机体免疫状态不同而存在差异,结果为了解C3d与鸡体健康状况之间的关系提供了依据.