鸡γ干扰素与补体C3 d主要片段的串联表达及活性测定

• 作者: 侯颖 宫强 杜梦璇 牛明福 范逸文 鲍永毅
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡γ-干扰素 补体C3d 原核表达 抗病毒活性 免疫佐剂
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 662-666
• 页数: 5页
• 分类号: S585.31
• 字数: 3535字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2020.06.005

摘要

目的:本研究将干扰素和补体C3d主要片段进行串联表达,以研究共同刺激细胞的活性,观察它们的免疫佐剂效应,以期获得一种更高效的免疫佐剂.方法:本实验合成了chIFN-γ、chIFN-γ-C3d基因,利用pET29a(+)构建重组载体,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达.将重组蛋白纯化后进行鸡胚内抗新城疫病毒活性研究;并与DNA疫苗共同免疫雏鸡,HI法测定抗体水平,MTT法测定淋巴细胞增殖情况,并分析免疫器官指数变化.结果:成功表达纯化了chIFN-γ和chIFN-γ-C3d两个蛋白,SDS-PAGE电泳检测分子量分别约为17 kD和21 kD,His标签抗体检测表明蛋白表达正确.鸡胚内抗病毒活性测定表明一定浓度的chIFN-γ 和chIFN-γ-C3d均可以抑制新城疫病毒的增殖,低浓度时chIFN-γ-C3d抗病毒活性高于chIFN-γ;与DNA疫苗联合免疫后,HA组、γ+HA和γ+C+HA组抗体水平持续升高,且与HA组相比,γ+C+HA组抗体水平更高,差异有极显著统计学意义(P<0.01).第7周开始γ+C+HA组的抗体水平均高于γ+HA组,差异有极显著统计学意义(P<0.01).HA、γ+HA和γ+c+HA组淋巴细胞均显示出较高的增殖活性,且γ+c-HA组增殖活性更高,与HA组差异有极显著统计学意义(P<0.01),与γ+HA相比差异有显著统计学意义(P<0.05),说明chIFN-γ-C3d、chIFN-γ都具有促进淋巴细胞增殖的作用,并且chIFN-γ-C3d比chIFN-γ作用更强,差异有显著统计学意义(P<0.05).第9周时,γ+C+HA组胸腺指数和法氏囊指数都高于其他组,与γ+HA组相比差异有极显著统计学意义(P<0.01).结论:实验表明,相比于单独的DNA疫苗,chIFN-γ-C3d或chIFN-γ与DNA疫苗联合免疫具有更强的免疫效果,chIFN-γ-C3d比单独的chIFN-γ效果更好,可作为一种新的免疫佐剂应用于DNA疫苗的免疫.