HPV-16L1植物表达载体的构建及HPV-16L1在转基因烟草中表达的鉴定

• 作者: 刘红莉 司履生 李文生 王一理 王喆之 陈宏伟 雷霆
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒 病毒样颗粒 转基因烟草 植物疫苗 根瘤农杆菌
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 827-831
• 页数: 5页
• 分类号: R378.2|R394.33
• 字数: 3801字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.06.004

摘要

利用PCR技术克隆人乳头瘤病毒HPV-16 L1蛋白编码基因,将其重组于pUCmT和pBI121中,构建含HPV-16L1基因的植物双元表达载体pBI-L1,L1基因由CaMV 35S启动子控制表达.采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草(Nicotiana tobacum L.),获得HPV-16L1转基因烟草植株.经PCR及Southern杂交分析,HPV-16L1基因整合到烟草基因组中;Western blot和ELISA分析检测显示转基因烟草叶片蛋白可与HPV-16 L1单克隆抗体特异性反应,且定位于55kD处,其最高表达量占烟草叶片总可溶蛋白的0.076%.小鼠红细胞凝集试验(HA)及小鼠红细胞凝集抑制试验(HAI)显示转基因烟草叶片蛋白可引起小鼠红细胞凝集.结果表明已成功地构建了HPV-16L1的植物双元表达载体,并证实了利用转基因烟草植物能够表达出HPV-16L1蛋白,所表达的L1蛋白具有良好的抗原性并具有介导小鼠红细胞凝集的生物活性.