糖多孢红霉菌λC3-SRR突变体的构建及其产物鉴定

• 作者: 任洌 刘传暄 张华 张部昌 李凌凌 马清钧
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 糖多孢红霉菌 聚酮合成酶 同源重组 酮内酯类 3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 314-318
• 页数: 5页
• 分类号: Q754
• 字数: 4423字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2004.04.005

摘要

目的:构建糖多孢红霉菌KR6酶域基因失活突变体,探讨SRR氨基酸相应9核苷酸去除突变体与合成酮内酯类化合物3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B的关系.方法:以糖多孢红霉菌基因组DNA为模板,用重叠PCR技术扩增出缺少SRR氨基酸相应9核苷酸的KR6酶域DNA片段,并克隆到载体pWHM3上,构建了同源重组质粒pWHM3-SRR.将pWHM3-SRR质粒转化糖多孢红霉菌λC3菌株,筛选出质粒整合到染色体上红霉素合成基因位点的整合体λC3-A、B和C.λC3-A在无硫链丝菌肽(Thio)的R3M斜面上生长两代后,制备的原生质体涂R3M平皿,挑选出不能在含Thio的R3M斜面上生长、发酵液也无抑制枯草芽孢杆菌活性的突变菌株λC3-SRR.结果:部分基因组DNA序列分析表明,糖多孢红霉菌λC3-SRR染色体上SRR氨基酸相应9核苷酸已经敲除,Zabspec Fab质谱分析证实λC3-SRR菌株合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B.结论:糖多孢红霉菌KR6酶域SRR氨基酸相应9核苷酸敲除的λC3-SRR突变菌株可以合成3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B,SRR为KR6酶域上NADPH 2′-磷酸结合位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘传暄	军事医学科学院生物工程研究所	33	231	10.0	14.0
2	马清钧	军事医学科学院生物工程研究所	147	1208	18.0	29.0
3	张部昌	军事医学科学院生物工程研究所	82	550	12.0	20.0
9	张华		21	197	9.0	13.0
13	李凌凌	安徽大学生命科学学院	4	68	4.0	4.0
14	任洌	军事医学科学院生物工程研究所	1	11	1.0	1.0