嗜麦芽单胞菌AT18的染色体DNA高活性启动子的克隆

• 作者: 刘变芳 郭蔼光 阿萨斯
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 嗜麦芽假单胞菌AT18 启动子 高活性片段 亚克隆技术
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: Q785
• 字数: 3899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1389.2004.01.005

摘要

将从嗜麦芽单胞菌AT18的染色体DNA获得一段约1.4kb的DNA片段克隆进启动子探针载体pKK232-8,转化大肠杆菌HB101获得重组质粒PAS1(具有很强启动活性),可抗Cm达1 000 μg/mL.实验采用亚克隆技术,经过提取质粒、酶切、电泳、回收、连接等步骤将该有启动活性的插入片段缩小,欲获得一段有强的启动功能的最小活性片段.首先通过单酶切图谱发现该插入片段上有3个单酶切位点即kpnI、BglⅡ和PstI;再将双酶切所得各DNA片段设计为不同的方案,或直接连接,或末端补平连接,或亚克隆处理,以启动子探针质粒pKK232-8为载体,转化大肠杆菌HB101,利用氯霉素平板筛选重组质粒.结果表明,该插入片段的活性功能存在于Kpn1和HindⅢ双酶切所得的一段约300 bp的DNA片段,将该小片段进行亚克隆所得重组质粒PAS1-3仍有很强的Cm抗性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭蔼光	西北农林科技大学生命科学学院	110	1264	19.0	27.0
2	刘变芳	西北农林科技大学食品科学与工程学院	27	123	6.0	10.0
3	阿萨斯	西北农林科技大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0